离心管浓缩操作简单。选择合适的浓缩离心管,加入待处理样品,按照离心管的说明进行离心,最后回收截取的样品。在离心力的作用下,溶液中的小分子溶质和溶剂通过超滤膜被收集在滤液收集瓶中,而大分子溶质则被超滤膜截留在浓缩离心管中。这种分离的主要依据是分子的大小,但其他因素如分子形状和电荷也会受到影响。
一般情况下,超滤回收率可达90%以上。大部分样品损失是由于膜表面和容器表面的非特异性吸附。因此,选择一款信誉良好的优质浓缩离心管是非常重要的。
如何选择浓缩离心管
按体积
不同系列的浓缩离心管适用于处理不同体积的样品。您可以根据您的样本大小进行选择。但如果样品浓度低,体积大,可以选择体积较小的浓缩离心管重复样品离心。
2. 选择合适的截留分子量 (MWCO)
一旦确定了样品体积,下一步就是选择合适的 MWCO。对于蛋白质,建议所选膜的 MWCO 为要保留的分子大小的 1/6-1/3。通常,截止孔径越小,流速越慢,但废品率越大。因此,如果主要考虑流量,建议选择MWCO为1/3的过滤器;如果考虑浓缩比,最好选择密度更大的膜。
浓缩离心管的应用
集中
这是每个人都熟悉的应用程序。超滤有助于稀释蛋白质或 DNA/RNA 样品的浓缩。它是温和的,不会中断多达 100 kb 的 DNA,不会导致蛋白酶活性的损失,而且效率也很高,回收率通常在 90% 以上。
脱盐和缓冲液交换
超滤为去除和交换溶液中的盐、去除变性剂、分离复杂分子、去除低分子量组分或快速改变离子或 pH 环境提供了一种方便有效的方法。例如,当用两种或多种限制性内切酶消化时,可能找不到通用的消化缓冲液,可以用浓缩离心管代替缓冲液。
组件分离
当然,超滤并不能完全分离两个分子量相近的分子。为了有效分离,待分离分子的分子量必须至少相差一个数量级 (10X)。对于PCR产物的纯化和回收,超滤是合适的。PCR 反应混合物含有多种盐类、游离核酸、甘油、蛋白质和引物,因此大多数下游应用需要对 PCR 产物进行一定程度的纯化。超滤法速度快、操作少、产量高、不损伤DNA。