由于新型冠状病毒的爆发,各地PCR基因扩增实验室的建设也逐渐加快。病毒核酸检测是诊断新冠肺炎的重要标准。 PCR实验室又称基因扩增实验室,采用分子生物学技术。通过扩增核酸片段,也可以看作是一种特殊的核酸体外复制。利用基因追踪系统掌握人体内病毒含量,检测精度可达纳米级。新型冠状病毒核酸检测也属于此类技术,是诊断新冠肺炎的重要标准。
PCR基因扩增实验室主要是扩增检测核酸模板。可以看出,实验室中最容易发生交叉污染,导致测试样本出现假阳性结果。因此,PCR实验室有着严格的设计要求和标准。
现在PCR技术已经广泛应用于传染病、肿瘤靶向、生殖遗传学等领域,但由于该技术对待测核酸进行了多次大量扩增,即使是极少量的污染容易导致假阳性结果其次,PCR技术要求比较高,实验过程复杂,如果中间环节有遗漏或遗漏,都可能导致假阴性结果。
PCR 实验中污染的主要原因有四个:
1. 是PCR扩增产物的污染。这也是最常见的污染原因。 PCR产物重复扩增后,复制量远远超过PCR的检测限,因此即使是极少量的污染也足以造成实验结果的假阳性。
2. 试剂污染。试剂制备过程中,接触被污染的容器、移液管、移液器吸头、溶液等,导致试剂被污染。
3. 待测样品被污染。放置样品的容器被污染或因容器密封不严导致样品被污染;其次,在核酸提取过程中使用被污染的移液器或移液器吸头导致样品被污染;另外,有些样本含有病毒,如果扩散到空气中,可能会形成交叉污染。
4. 气溶胶污染。如果气溶胶中含有病毒等污染物扩散到空气中,极有可能造成PCR产物污染。气溶胶是由空气和液体表面之间的摩擦产生的。打开盖子、摇动反应管以及反复吸入污染采样器会形成气溶胶,从而导致交叉污染。经计算,一个气溶胶粒子可含有48 000个拷贝,因此应特别注意气溶胶造成的污染问题。只要PCR实验室受到污染,之前的结果报告就会失效,无法进行其他实验操作。必须查明污染源并彻底清除,才能获得准确有效的实验结果。